1 Introduction
Depuis l'Antiquité, les extraits volatils des plantes aromatiques sont recherchés, non seulement pour l'assaisonnement des cuissons et pour rendre plus agréables les bains et l'eau de toilette, mais également et surtout en raison de leurs pouvoirs antiseptique et désinfectant.
À la suite des travaux fondamentaux de Morel et Rochaux [1], qui tentèrent d'établir une méthode comparative pour la connaissance systématique du pouvoir antimicrobien des huiles essentielles, de nombreuses recherches ont été consacrées à l'étude de la composition chimique des huiles essentielles.
Schweisheinmer a démontré que les huiles essentielles, dont les esters sont le constituant principal, se montrent particulièrement actives. Elles sont suivies par les hydrocarbures aromatiques, les oxydes, les phénols, les aldéhydes, les cétones et les alcools [2].
Weenem et al. [3] ont rapporté que Lantana camara Linn. (Verbenaceae), arbuste aromatique poussant dans les régions tropicales et subtropicales, est recherché pour la lutte contre le paludisme en Inde.
Les premières études faites par Avadhoot [4] et Sharma [5] sur l'huile essentielle extraite des graines de cette plante ont révélé d'intéressantes propriétés antiseptiques et antifongiques.
Au Bénin, les feuilles de cette plante aromatique sont souvent utilisées en pharmacopée traditionnelle pour le traitement des affections de la peau chez les animaux domestiques, affections pour lesquelles les tiques jouent le rôle le plus important, aussi bien dans l'évolution de la maladie que dans sa transmission.
En raison de l'effet néfaste des dermatoses bovines sur le développement du cheptel national, on a souvent eu recours aux antibiotiques de synthèse dans le traitement de ces pathologies. Malheureusement, ce traitement très onéreux semble peu efficace, puisque la maladie réapparaît presque toujours pendant la saison des pluies [6].
Face aux résultats mitigés obtenus avec les produits de synthèse, il est urgent de rechercher de nouvelles sources naturelles de produits antimicrobiens. Dans cet ordre d'idées, il nous a paru fondé d'étudier la composition chimique de l'huile essentielle extraite des feuilles de Lantana camara Linn. récoltées au Bénin, et d'élucider son action sur les bactéries et tiques.
Le présent travail présente les résultats de cette étude.
2 Partie expérimentale
2.1 Extraction et analyse des huiles essentielles
2.1.1 Extraction des huiles essentielles
Les huiles essentielles ont été obtenues par hydrodistillation de tiges feuillées (feuilles de Lantana camara Linn.) par fractions de 250 g pendant une durée de 3 h, en utilisant un extracteur de type Clevenger. Les essences moins denses que l'eau sont recueillies par simple décantation et séchées sur sulfate de sodium anhydre avant analyse.
2.1.2 Analyse des huiles essentielles
L'analyse des huiles essentielles a été effectuée par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CPG-SM). Le couplage a été effectué sur un appareil Hewlett-Packard modèle 5970 (système de détection quadripolaire), équipé d'une colonne capillaire en silice fondue de 2 mm × 0,23 mm de type DB1 ; programmation de température de 50 °C à 200 °C, avec un gradient de 5 °C min–1. Les indices de rétention ont été déterminés par chromatographie en phase gazeuse sur deux colonnes capillaires en silice fondue (25 m × 0,25 mm) de type OV-101 et Cabowax 20 M, avec une programmation de température identique à celle utilisée pour le couplage (appareil Shimatzu GC-14A équipé d'un détecteur à ionisation de flamme et d'un intégrateur modèle C-R4A).
2.2 Milieux de culture
2.2.1 Préparation des milieux de culture
Deux milieux de culture, notés M1 et M2, ont été préparés :
- • milieu M1 : 45,5 g de Sabouraud sont dissous dans 1 l d'eau distillée ; le pH est ajusté à 6,8 ;
- • milieu M2 : 17 g d'agar-agar sont dissous dans 500 ml de moût de bière ; on ajoute ensuite 500 ml d'eau distillée stérilisée ; le pH du milieu est ajusté à 6,8.
Ces milieux de culture sont ensuite stérilisés à l'autoclave à 120 °C pendant 20 min.
2.2.2 Culture et isolement des microorganismes
2.2.2.1 Culture des microorganismes
La technique utilisée est celle de dilution en série géométrique de la solution mère S0 par la méthode d'Agar [7].
2.2.2.2 Obtention et isolement des souches pures
Après fusion des milieux M1 et M2, on a procédé à leur coulage à chaud dans des boîtes de Pétri. Ces dernières sont laissées à la température ambiante pendant 48 h. On procède ensuite au repiquage de la zone d'inhibition. Cette opération, répétée trois fois, a permis d'obtenir des souches pures.
2.2.3 Test d'activité antimicrobienne avec les huiles essentielles
2.2.3.1 Obtention de suspensions
Ces souches pures obtenues sont ensemencées dans les tubes à essai contenant les milieux M1 et M2. À partir de ces tubes, on réalise des suspensions pour les divers tests.
2.3 Matériel animal
Les tiques (Amblyoma variegatum) ont été prélevées sur les bovins élevés sur les fermes du Cenou (Campus d'Abomey-Calavi) et de Kpinnou (département du Mono). Elles sont conservées dans des boîtes en plastique stériles, avec trois à quatre trous d'aération, avec du coton imbibé d'eau.
L'expérience consiste à mettre un nombre variable de tiques femelles ou mâles, préalablement séparées, dans différentes boîtes de pétri. On y ajoute 1 μl de chaque huile essentielle à l'aide d'une micropipette. La durée de vie des tiques est suivie à l'aide d'un chronomètre.
3 Résultats et discussions
3.1 Composition chimique des huiles essentielles de Lantana camara Linn
Le rendement en huile essentielle est de 0,22 %. Sa composition chimique, reportée sur le Tableau 1, comprend comme composés majoritaires le β-caryophyllène (18,5 %), le sabinène (13,1 %), l'α-humulène (10,0 %), le 1,8-cinéole (9,0 %) et le δ-guaiène 5,0 %.
Composition chimique de l'huile essentielle extraite des feuilles de Lantana camara Linn. récoltées sur le campus d'Abomey-Calavi (Bénin)
| Composants | IKoV101 | Pourcentage |
| α-Thujène | 924 | 0,2 |
| α-Pinène | 934 | 1,5 |
| Camphène | 946 | 0,7 |
| Octène-3-ol | 965 | 0,6 |
| Sabinène | 968 | 13,1 |
| β-Pinène | 975 | 1,6 |
| Myrcène | 983 | 1,5 |
| α-Phellandrène | 994 | 1,0 |
| δ-3-Carène | 1004 | 1,6 |
| α-Terpinène | 1012 | 0,2 |
| p-Cymène | 1016 | 0,2 |
| 1,8-cinéole | 1020 | 9,0 |
| (Z)-β-Ocimène | 1028 | 0,6 |
| (E)-β-Ocimène | 1039 | 0,8 |
| γ-Terpinène | 1051 | 0,5 |
| Hydrate de sabinène (trans) | 1062 | 0,7 |
| Terpinolène | 1082 | 0,4 |
| Linalol | 1086 | 0,7 |
| Camphre | 1129 | 1,3 |
| Bornéol | 1151 | 0,6 |
| Terpinène-4-ol | 1163 | 1,5 |
| α-Terpinéol | 1180 | 0,7 |
| α-Copaène | 1376 | 0,5 |
| β-Élémène | 1387 | 0,8 |
| β-caryophyllène | 1419 | 18,5 |
| Aromadendrène | 1434 | 0,7 |
| α-Humulène | 1451 | 10,0 |
| γ-Muurolène | 1472 | 0,4 |
| δ-Guaiene | 1495 | 5,0 |
| Germacrène D | 1478 | 2,0 |
| γ-Cadinène | 1506 | 0,6 |
| δ-Cadinène | 1514 | 0,4 |
| Davadone (I) | 1538 | 1,5 |
| Davadone (II) | 1544 | 1,6 |
| trans-Nérolidol | 1549 | 4,0 |
| Davadone (III) | 1562 | 0,8 |
| Spathulénol | 1565 | 1,0 |
| Oxyde de caryophyllène I (trans) | 1570 | 0,8 |
| Oxyde d'humulène | 1594 | 1,2 |
| Torreyol | 1630 | 0,9 |
| T-muurolol | 1639 | 2,3 |
| N.I.(3) | 1651 | 1,4 |
| N.I.(5) | 1745 | 1,3 |
| Total | 94,7 | |
| Monoterpènes hydrocarbonés | 31,0 | |
| Monoterpènes oxygénés | 5,5 | |
| Sesquiterpènes hydrocarbonés | 42,2 | |
| Sesquiterpènes oxygénés | 14,1 | |
| Composés aliphatiques | 1,9 | |
| Composés non identifiés | 2,7 |
Cette huile est caractérisée par un taux élevé de sesquiterpènes hydrocarbonés (42,2 %), suivis par des monoterpènes hydrocarbonés (31,0 %), des sesquiterpènes oxygénés (14,1 %), des monocarbones oxygénés (5,5 %) et des composés aliphatiques (1,9 %).
3.2 Action sur les microorganismes
La Fig. 1 nous donne le résultat du dénombrement des colonies en fonction de la concentration des bouillons de culture.
Nombre de colonies dénombrées par boîte de Pétri.
De l'analyse de cette courbe, il ressort que la diminution du nombre de microorganismes se fait selon la dilution.
Les résultats du dénombrement regroupés dans le Tableau 2 montrent les zones de croissance retardée qui sont représentées par des signes « plus » (++).
Effets inhibiteurs des substances actives des huiles essentielles sur les microorganismes
| N° des boîtes de Pétri | Lantana camara Linn. |
| 1 | – |
| 2 | ++ |
| 3 | – |
| 4 | – |
| 5 | +++ |
| 6 | – |
| 7 | +++ |
| 8 | +++ |
Le signe « moins » (–) indique que les huiles essentielles n'ont pas d'action sur les microorganismes contenus dans ces boîtes de Pétri.
L'examen de ce tableau montre que l'huile essentielle de Lantana camara Linn. possède un pouvoir inhibiteur fort et assez étendu sur les microorganismes étudiés.
Après repiquage de la zone de croissance retardée, on a constaté l'apparition des colonies dans certaines boîtes de Pétri. L'identification des microorganismes a permis de constituer le Tableau 3 et de procéder à la vérification des propriétés antimicrobiennes.
Propriétés antimicrobiennes des huiles essentielles de Lantana camara Linn
| No des Boîtes de Pétri | Description | Genre | Lantana camara Linn. | |
| Effet après repiquage | Propriétés | |||
| 2 | Levures isolées grosses de formes ovoïdes et lenticulaires | Saccharomyces spp. | destructeur | fongicide |
| 5 | Bactéries Gram (+) corynéformes | Corynebacteriaceae spp. | destructeur | bactéricide |
| 6 | Levures encapsulées | Sporobolomyces | destructeur | fongicide |
| 7 | Levures en chaîne ou en amas | Torulopsis candida | inhibiteur | fongiostatique |
| 8 | Levures ovoïdes et lenticulaires | Hansenula spp. | inhibiteur | fongiostatique |
3.3 Action sur les tiques (Amblyomma variegatum)
Les Figs. 2 et 3 illustrent l'action des huiles essentielles sur les tiques mâles et femelles.
Action destructrice de l'huile essentielle de Lantana camara Linn. sur les mâles d'Amblyomma variegatum.
Action destructrice de l'huile essentielle de Lantana camara Linn. sur les femelles d'Amblyomma variegatum.
L'examen de ces figures montre que les tiques femelles résistent davantage à l'action destructrice de l'huile essentielle de L. camara Linn. que les tiques mâles. Toutes les tiques mâles sont détruites après 45 min, alors que les tiques femelles ont résisté jusqu'à 325 min.
4 Conclusion
De l'analyse de la composition chimique des huiles essentielles, il ressort que l'essence de Lantana camara Linn. a pour composés majoritaires le β-caryophyllène (18,5 %), le sabinène (13,1 %), l'α-humulène (10,0 %), le 1,8-cinéole (9,0 %) et le δ-guaiène (5,0 %).
L'étude de l'action de l'huile essentielle de Lantana camara Linn. sur les microorganismes testés a révélé qu'elle possède des propriétés fongicides (elle détruit complètement le Saccharomyces spp. et le Sporobolomyces), bactéricides (elle détruit complètement le Corynebacteriaceae spp.) et fongiostatiques (elle inhibe la croissance de Torulopsis, candida ou de Hansenula).
L'huile essentielle de Lantana camara Linn. exerce une action destructrice sur les tiques (Amblyoma variegatum). Il est à noter que les tiques femelles résistent davantage à cette huile que les mâles.